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新聞詳情
大鼠腫瘤組織選用單細胞懸液制備儀進行研磨的關鍵步驟與注意事項及實驗效果
日期：2024-12-21 12:36
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摘要：在腫瘤**學領域，單細胞技術可以幫助科學家們更好地了解腫瘤細胞的生長和擴散機制，以及**系統(tǒng)如何識別和攻擊腫瘤細胞。然而，組織樣本單細胞懸液制備是單細胞測序實驗中至關重要的工作，其質量好壞直接影響了后續(xù)建庫的成敗以及測序數據產出質量。因此，單細胞懸液制備除了需要有經驗豐富的人員來進行指導/操作，還得依靠靠譜的單細胞懸液制備儀來助力。
在腫瘤**學領域，單細胞技術可以幫助科學家們更好地了解腫瘤細胞的生長和擴散機制，以及**系統(tǒng)如何識別和攻擊腫瘤細胞。然而，組織樣本單細胞懸液制備是單細胞測序實驗中至關重要的工作，其質量好壞直接影響了后續(xù)建庫的成敗以及測序數據產出質量。因此，單細胞懸液制備除了需要有經驗豐富的人員來進行指導/操作，還得依靠靠譜的單細胞懸液制備儀來助力。
一、實驗設備
單細胞懸液制備儀
JX-CKSM-6WK
二、實驗過程
01 組織獲取、清洗
1.荷瘤鼠麻醉后處死，取腫瘤組織200-500 mg，迅速置于裝有4 ℃不含血清的培養(yǎng)液或PBS的無菌培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放置冰上快速拿回實驗室。(一小時內分離腫瘤細胞)。
2.上述組織使用含有1 %雙抗的PBS洗滌三次，眼科剪去除組織塊中的脂肪、壞死組織等無用組織。
02 酶消化、機械分離
1.用剪刀將組織切割成1-2 mm3左右的小塊，用4℃ D-Hank's液洗1次，盡量去除剪碎組織過程中產生的組織碎片。
2.樣品管內加入200-500 mg組織及消化酶，放入單細胞懸液儀，選擇內置程序運行。
3.消化完成后，適當震蕩樣品管，觀察渾濁度與顏色，并用細胞篩過濾出單細胞懸液，隨后加入消化終止液，*終得到細胞懸液。
03 洗滌和重懸（選擇性去紅）
1.如有大量紅細胞污染，加入紅細胞裂解液（自備）裂紅，230-250 g離心后加入PBS重懸，隨即230-250 g離心洗滌并培養(yǎng)基重懸。
2.結果：單細胞懸液應當保持95 %以上活率（PI染色流式或臺盼藍染色鏡檢），總數目在3×107左右。
操作流程圖
三、樣品前后對比
樣品研磨前效果圖
樣品研磨后效果圖
實驗解決的問題
從組織獲得存活單細胞是一個復雜過程，處理當中常存在處理時間長、細胞處于逆境狀態(tài)時間長、細胞得率低、細胞存活率低、操作繁瑣等問題。使用JX-CKSM-WK系列單細胞懸液制備儀，具有起始組織量小，時間短，細胞得率高，細胞活性高的特點。常應用于流式細胞術/單細胞測序/原代細胞培養(yǎng)等實驗。
